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                新品上市 α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒(双试剂)

                复星长征体外〗诊断2021-10-03 13:43:47
                α-L-岩藻糖苷酶生化诊断试剂临床研究
                上海复星长征医学科学有限公司市场部
                目前国内大多数生化试剂厂家生产销售的都是AFU单试剂,复星长征自主▅研发的AFU液体双试剂具有比同类产品更好的抗干扰能力,而且试剂特异性高,线性范围宽。
                摘要
                目的:α-L-岩藻糖苷酶试∞剂(CNPF底物法)日本Olympus AU680全自动生化分析仪建立的检测系统的分析性能进行评价,探讨适合常规和自动化检测血清或血浆中α-L-岩藻糖苷酶的方法。方法:对自建检测系统线性、精密度等技术指标进行测定。采用NCCLS EP9文件与进口美国Diazyme α-L-岩藻糖苷酶试剂(CNPF底物法)。结果:自主研发的α-L-岩藻糖苷酶试剂(CNPF底物法)两个水平的变异系数(CV)分别为2.73%、1.52%,在5~150U/L范围内,线性良好。两种试剂测█定血清α-L-岩藻糖苷酶结果相关系数较好,相关系数r为0.995。本公司试剂测定同一人份血清和血浆样本中的α-L-岩藻糖苷酶结果相关系数较好,相关系数r为0.998。结论:自主研发的α-L-岩藻糖苷酶试剂盒操作简便、快速、准确、稳定,结果准确,可用于临床病人血清或血浆α-L-岩藻糖苷酶的检测。
                关键词:α-L-岩藻糖苷酶;诊断试剂;临床研究
                α-L-岩藻糖苷酶(α-L- Fucosidase ,AFU) 是一种溶酶体酸性水解酶,分类名为α-L-岩藻糖苷酶水解酶(EC 3.2.1.51)。遗传性AFU 缺乏可使含岩藻糖基的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖苷这些物质从初生儿起就在组织中堆积,引起岩藻糖苷贮积病。组织细胞、尿液和血清中AFU 测定可协助该病的诊断,并借以与其他遗传性粘多糖贮积病鉴别,这也是早期对AFU 检测的主要目的[1]。1980 年Deugnier 等发现原发性肝癌(PHC) 病人血清AFU 升高,并被后来的研究所证实。从此,对AFU 临床意义有了全新的认识。
                近二十年来,随着对AFU 的深入研究,检测方法也不断发展。目前对AFU 的主要检测方法从放免法、荧光法、终点法、速率法不断更新[2]。
                由于肝癌患者分离血清需要时间长,为了能快速回报结果,临床常采用抗凝血进行测定。但研究 显示AFU试剂测定肝素抗凝血浆与血清值有明显差异,可能与肝素为阴离子黏多糖,带有大量负电荷,呈强酸性,与所用试剂中的碱性缓冲液形成不溶于水的盐类化合物及反应液沉浊使试剂的吸光度升高有关[3]。本公司》通过改进试剂生产工艺,使的同一份样本的血清样本跟肝素抗凝血浆样本检测结果一致。
                1 材料与方法
                1.1 仪器?
                日本 Olympus AU680 全自动生化分析仪。
                1.2 试剂、校准品和质控品
                对照试剂(X):Diazyme AFU生化诊试剂,批号为 5347,实验试剂(Y):自主研发AFU试剂,批号为D20130703校准品批号为NTS001520,配套质控品水平1批号为NTC121510,配套质控品水平2批号为NTC221310。
                1.3 标本
                本研究收集的标本为上海复星长征公司医学科学有限公司员工100人,静脉采血,样本新鲜无溶血、无黄疸。同一份样本各采两管血,一份血清样本一份肝素血浆样本。
                1.4 测定方法及条件
                按照以下参数来设置奥林巴斯AU680全自动生化分析仪:
                CNPF底物法:温度37 ℃,主波长410nm,副波长520 nm,吸光度范围0~2 A,比色杯光径1.0 cm,反应方向为吸光度上升的反应,样本用量20 μL,试剂1用量135 μL,孵育时间5min,试剂2用量45 μL,延迟时间90 s,测定时间180 s,校准模式为两点定标。
                1.5 空白吸光度
                用试剂(盒)测试生理盐水,记录试剂(盒)参数规定读数点405 nm下的吸光度值(A),重复两次。
                1.6 重复性
                在重复条件下,测试AFU活性在(45±15)U/L和(90±30)U/L的控制血↘清,将两水平控制血清分别测试10次,计算测量值的平均值(X)、标准差(s)和变异系数(CV)。
                1.7 线性试验
                用接近线性范围下限的低活性样品稀释接近线性范围上限▲的高活性样品,混合成5、10、20、50、100、150 U/L的6个稀释浓度(xi),用各稀释浓度分别测试试剂(盒),每个活性浓度测试3 次,分别求出每个活性浓度样品检测结果的均值(yi)。以6个稀释活性浓度(xi)为自变量,以检测结果↓均值(yi)为因变量作线性回归。
                1.8 血清和血浆测定结果比较
                100人份的血浆和血清样本同时检测AFU,并比较测定结果。
                1.9 长征与Diazyme试剂的对比试验
                随机选择50份样本,每份样本作双份测定,结果取均值,按NCCLS EP9文件的评价方案统计结果
                2 结果

                2.1 空白吸光度 ? ??
                三次试剂空白的检测结果分为0.0212,0.0233,0.0241,试剂的空白变化率的检测结果分别为0.001,0.0008,0.0006。试剂空白结果小于0.3,试剂的空白变化率小于0.002。
                2.2 重复性
                两个水平的平均值分别为50.5 U/L和104.7 U/L,变异系数(CV)分别为2.73%、1.52%,均小于5%。
                2.3 线性试验理论值(x)与测定值(Y)之间的线性回归
                Y=0.9869X-0.4762,R=0.9999,AFU浓度在5-150 U/L范围内线性关系良好。
                2.4 血清与血浆标本AFU测定结果比较
                复星长征公司试剂对血清和血浆的测定AFU的检测结果的均值为24.36U/L,复星长征公司试剂对血浆AFU的检测结果的均值为24.96 U/L,两者差异无显著意义(t=0.23,P>0.05),血清和血浆测定结果之间具有良好的相关性(r=0.998)。如下图:
                2.5 自主研发的α-L-岩藻糖苷酶试剂(CNPF底物法)与Diazyme试剂⊙的比对
                Diazyeme公司试剂对100例血清AFU的检测结果的均值为25.44U/L,自主研发的α-L-岩藻糖苷酶试剂(CNPF底物法)对AFU的检测结果的均值为 26.12U/L,两者无显著差异(t=0.23,P>0.05),所测AFU具有良好的相关性(r=0.995)。如下图:
                3 讨论 ?
                α-L岩藻糖苷酶(α-L- Fucosidase ,AFU)是新的诊断原发性肝癌的标志物,临床上还可用于肝硬化、肾脏疾病、糖尿病等的诊断、疗效评价以及预后判断。AFU主要采用连续监测法检测[4]。在日常工作中,为缩短样本周转时间和防止仪器样品针被堵,不少医院使用乙二胺四乙酸(EDTA)盐或肝素抗凝管采集样本[5]。我们采用本公司试剂对肝素是否干扰AFU测定进行了评价,为其临床应用提供依据。
                测定血清或血浆中AFU活性的方法常用的有CNPF底物法和化学发光法。本实验在全自动生化分析仪上以CNPF底物法检测血清中AFU活性的大小,目前国产AFU检测试剂大部分厂家只能用于检测血清样本,检测血浆样本时部分结果出负,而本公司研发的试剂盒血清样本和血浆样本都可检测,并且血清和血浆测定结果之间具有良好线性相ω关性;与Diazyeme公司试剂所测血清样本AFU活性具有良好的线性相关性。以上结果显示此方法操作简单、线性范围宽、重复性好、结果准确,自主研发的AFU试剂完全能满足市场上客户的需要。
                参考文献
                [1] 常连刚,王蕾.α-L-岩藻糖苷酶对糖尿病早期肾损害的诊断价值[J].检验医学,2012,27(6):495-499.
                [2] Clinical land Laboratory Standards Institute.Interference testing inclinical chemistry[S].EP7-A2,CLSI,2002..
                [3] 高小文,何宝明,魏丽萍,等.EDTA-K2抗凝剂对α-L-岩藻糖苷酶测定的干扰分析[J].国际检验医学杂志,2009,30(9):900001.
                [4] 于志伟.杨晓卫 段芳龄,等 血清 α-L-岩藻糖苷酶的测定方法.中华医学检验杂志,1992-15(3):139.
                [5] 马卫红,程钊,李建军.二代 α-L-岩藻糖苷酶试剂抗肝素干扰能力评价及临床应用↑[J].中国煤炭工业医学杂志,2010,13(4):514615.
                α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒
                CNPF底物法
                国械注准20163401518


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